A terhességi teszt a humán choriogonadotropin (hCG) hormon vizeletben vagy szérumban történő kimutatására alapszik. Ha megtermékenyülés történt, a hCG az ovuláció után 8-9 nappal, azaz a megtermékenyített petesejt beágyazódását követően 3-4 nappal jelenik meg a vizeletben. Ha a 28 napos ciklus 14. napján történt az ovuláció, a hCG-t vizeletben vagy szérumban a 23. nap körül lehet detektálni, az esedékes következő menstruáció kimaradása előtt akár 5 nappal is. Funkciója a beágyazódás elősegítése, valamint a sárgatest fenntartásában és fejlődésében játszik szerepet. A hCG mennyisége gyorsan növekszik, körülbelül 1,5-2 naponta megduplázódik, a terhesség első harmadában éri el maximumát, ami körülbelül 100.000 – 200.000 IU/liter, majd csökken, de a terhesség alatt folyamatosan kimutatható.
A hCG egy glikoprotein, amely alfa és béta alegységből áll. Rokon szerkezetű más gonadotropinokkal, a luteinizáló hormonnal (LH), follikulusz stimuláló hormonnal (FSH) és a pajzsmirigy stimuláló hormonnal (TSH). Az említett hormonok alfa-alegysége nagyon hasonló, de a biológiai specifitást biztosító béta alegységük eltérő.
A hCG intakt molekulaként található a keringésben olyan nők szérumában, akikben komplikációk nélküli terhesség alakult ki. A vesében gyorsan alegységeire hasad és azonnal kiürül. Ennek eredményeként a vizelet intakt hCG-t, és alfa- és béta-alegységeket tartalmaz, azonban csak az intakt hCG és a béta-alegységek őrzik meg immunológiai specifitásukat a vizeletben.
A mérés szilárd fázison (a reakciózónában található nitrocellulóz membránon) végbemenő, szendvics immunológiai vizsgálati eljáráson alapszik, a jelet hCG béta-alegységére specifikus, jelölt monoklonális ellenanyag biztosítja.